Etap 3:
Analiza spektrum serowarów bakterii Salmonella oraz stabilności bakteriofagów
Wprowadzenie
Etap trzeci obejmował okres od 23 kwietnia 2024 do 30 lipca 2024 roku. Jego głównym celem było zbadanie, które serowary bakterii Salmonella mogą być skutecznie eliminowane przez wyizolowane bakteriofagi. Dodatkowo, przeprowadzono badania nad stabilnością bakteriofagów w różnych warunkach temperaturowych oraz ich morfologią przy użyciu mikroskopu elektronowego. Etap ten był kluczowy dla oceny możliwości praktycznego zastosowania bakteriofagów w przemyśle drobiarskim.
Określenie spektrum serowarów bakterii Salmonella
Aby określić, jakie serowary bakterii Salmonella są eliminowane przez wyizolowane bakteriofagi, przeprowadzono testy miareczkowania na płytkach z dwuwarstwowym agarem. Do tego celu wykorzystano serię rozcieńczeń lizatów fagowych, które nanoszono na murawę bakteryjną poszczególnych szczepów Salmonella. Po inkubacji w temperaturze 37°C, analizowano obecność łysinek fagowych – miejsc, w których bakteriofagi zniszczyły kolonie bakterii.Eksperymenty te były wykonywane dla każdego z 106 szczepów bakterii Salmonella, które pochodziły z kolekcji zgromadzonej w trakcie pierwszego projektu badawczego. Wyniki pozwoliły określić, które bakteriofagi posiadają szerokie spektrum działania, a które mają ograniczoną skuteczność wobec wybranych serowarów.
Sprawdzenie stabilności bakteriofagów
Kolejnym zadaniem było zbadanie stabilności bakteriofagów w różnych warunkach temperaturowych. Lizaty fagowe podzielono na dwie grupy: jedna była przechowywana w temperaturze pokojowej, a druga w chłodniach w temperaturze +4°C. Stabilność wirusów była sprawdzana co 30 dni, a testy przeprowadzano za pomocą miareczkowania, podobnie jak w przypadku badania spektrum działania fagów.
Analiza morfologii bakteriofagów
Ostatnim etapem badań było przeprowadzenie analizy morfologicznej wyizolowanych bakteriofagów przy użyciu mikroskopu elektronowego. Zdjęcia wirionów fagowych pozwoliły na dokładną ocenę ich budowy, co jest kluczowe dla oceny ich potencjalnych zastosowań. Bakteriofagi zostały podzielone na dwie grupy: posiadające długie ogonki, co może być istotne dla walki z biofilmami, oraz bakteriofagi bezogonkowe, które mają inne właściwości biologiczne.Zdjęcia wykonane przy pomocy mikroskopu elektronowego potwierdziły jednorodność preparatów bakteriofagowych, co oznacza, że każdy lizat składał się z jednego szczepu fagowego.
Podsumowanie
Etap trzeci projektu zakończył się sukcesem. Wyniki testów potwierdziły, że większość bakteriofagów jest skuteczna wobec szerokiego spektrum serowarów bakterii Salmonella. Dodatkowo, potwierdzono stabilność fagów w różnych warunkach przechowywania, co ma kluczowe znaczenie dla ich przyszłych zastosowań w przemyśle. Zdjęcia z mikroskopu elektronowego dostarczyły szczegółowych informacji o morfologii wirusów, co pozwoliło na dalsze wnioski dotyczące ich potencjalnych zastosowań w walce z patogenami w hodowli drobiu.